identification of cryptosporidium parvum by pcr and its determination of protein pattern and immunogenic antigens

[ ' a b s t r a c t : r n c r y p t o s p o r i d i u m p a r v u m i s a n a p i c o m p l e x a n p r o t o z o a n p a r a s i t e w h i c h c a u s e s d i a r r h e a i n b o t h h u m a n a n d w i d e r a n g e o f a n i m a l s . s i n c e t h i s p r o t o z o a c a u s e s r e m a r k a b l e e c o n o m i c l o s s e s i n c a t t k e i n d u s t r y i n i r a n ' , ' t h e m o l e c u l a r d e t e r m i n a t i o n o f p o r o t o z o a a n d c h a r a c t e r i z a t i o n o f i t s p r o t e i n p a t t e r n a n d i m m u n o g e n i c a n t i g e n d a r e t h e a i m o f t h i s s t u d y . i n t h i s s t u d y ' , ' d i a r h e a t i c f e c a l s a m p l e s o f c a l v e s s u s p e c t e d f o r c r y p t o s p o r i d i o s i s w e r e c o l l e c t e d a n d i d e n t i f i e d . p u r i f i c a t i o n a n d c o n c e n t r a t i o n o f c r y p t o s p o r i d i a l o o c y s t s f r o m f e c a l s a m p l e s w a s p e r f o r m e d . o o c y s t s w e r e c o n f i r m e d a s c r y p t o s p o r i d i u m p a r v u m b y s e m i ' , ' n e s t e d p c r u s i n g s p e c i f i c p r i m e r s d e s i g n e d f r o m 1 8 s r r n a g e n e o f c r y p t o s p o r i d i u m p a r v u m . a c a l f w i t h n e g a t i v e a n t i b o d i e s a g a i n s t c r y p t o s p o r i d i u m p a r v u n m w a s i n f e c t e d w i t h 5 × 1 0 6 o o c y s t s . 5 d a y s a f t e r i n o c u l a t i o n ' , ' o o c y s t s w e r e i s o l a t e d a n d p u r i f i e d . s o l u b l e p r o t e i n s f r o m s p o r o z o i t e s w e r e p r e p a r e d a n d a n a l y z e d b y s d s ' , ' p a g e a n d w e s t e r n b l o t t i n g . t h e r e w a s a n i n t e n s e r e c o g n i t i o n o f s o m e 1 0 t o 1 0 0 k d a ' , ' t e n l o w m o l e c u l a r w e i g h t p r o t e i n s w e r e r e c o g n i z e d b e t w e e n 2 0 ' , ' 4 0 k d a ' , ' s i x s e p a r a t e d p r o t e i n b a n d s w a s r e c o g n i z e d b e t w e e n 4 0 ' , ' 7 0 k d a ' , ' i m m u n o r e a c t i v e p r o t e i n s w e r e p r e s e n t a t d i f f e r e n t m o l e c u l a r w e i g h t s b e t w e e n 1 7 ' , ' 2 6 0 k d a . t h r e e a n t i g e n s o f a p p a r e n t m o l e c u l a r w e i g h t s 2 0 ' , ' 3 0 k d a ' , ' t h r e e a n t i g e n b a n d s b e t w e e n 4 0 ' , ' 6 0 k d a a n d 2 b a n d s 7 0 ' , ' 7 5 k d a w e r e i d e n t i f i e d . a n t i b o d y r e s p o n s e s t o c r y p t o s p o r i d i a l a n t i g e n s a t h i g h m o l e c u l a r w e i g h t s w e r e s u c c e s s f u l l y d i a g n o s e d w i t h a p p a r e n t m o l e c u l a r w e i g h t s 1 3 0 ' , 1 7 0 , ' 2 1 6 a n d 2 5 7 k d a . r n k e y w o r d s : c r y p t o s p o r i d i u m p a r v u m ' , ' i m m u n o b l o t ' , ' s d s ' , ' p a g e ' , ' p c r ' , ' s e m i ' , ' n e s t e d p c r . ' ]